Kahverengi alabalığından (Salmo trutta, Linneaus 1766) oogoniyal kök hücre izolasyonu ve kültürü

Abstract

Bu tezde, dişi Dağ alabalıklarında, Salmo trutta macrostigma, (Salmo trutta, Linneaus 1766) oogoniyal kök hücre izolasyonu ve kültürü için pratik bir yöntem geliştirilmiştir. İlk olarak, oogoniyal kök hücre izolasyon ve kültüründe kullanılan S.t. macrostigma dişi balıklarının ortalama yaş, boy ve ağırlıkları sırasıyla 2,5-3 aylık, 14,65±1,66cm, boy 28,22±7,79g ağırlığında olarak kaydedilmiştir. İkincil olarak ovaryumların morfolojik ve histolojik durumları değerlendirilmiştir. Son olarak S.t. macrostigma oogoniyal kök hücreleri için izolasyon ve kültür şartları optimize edilmiştir. Perinukleolar aşamada olan gonadlarda en yoğun miktarda oogoniyal kök hücre olduğu saptanmıştır. Oogoniyanın yaşama oranı ve mitotik aktivitesi L-15 kültür vasatında, % 5'lik S.t. macrostigma serumu ile (kültür ortamı pH, 7,65; sıcaklık 20ºC) geliştirilmiştir. Hücrelerin izolasyonu sonucunda, oogoniyal kök hücre yoğunluğu 5,4*105 ±2,6*105 hücre/ml olarak, oogoniyal kök hücre hacmi ise 13,5 ml olarak hesaplanmıştır. Tezde, S.t. macrostigma için taşıyıcı anaç teknolojisinde ve hücre gen transfer sistemlerinde kullanılabilecek hücre hattı geliştirilmiştir. Oogoniyal kök hücre kültürü sonucunda transplantasyonda kullanılacak hücre miktarı 2,7*106 ± 1,3*106 olarak önerilmiştir.

A practical technique for oogonial stem cell isolation and culture of the female Brown trout (Salmo trutta macrostigma, S.t.macrostigma) were elucided in this thesis. Initially, appropriate age, size and weight of the female S.t. macrostigma for oogonial stem cell isolation and culture were identified as 2,5-3 month old, 14,65±1,66 cm, 28,22±7.79 g respectively. Secondly, morphological and histological ovary conditions were assessed. Finally, isolation and culture conditions for oogonial stem cells of S.t. macrostigma were optimized. The highest oogonial stem cells were measured in the perinucleolar stage of the ovary. Survival rate of oogonia and mitotic activities in L-15 culture media, with 5% serum of S.t. macrostigma (Culture media pH, 7,65; temperature 20ºC) were developed. Density of oogonial stem cells were measured as 5,4*105 ±2,6*105 cells/ml. Whereas, oogonial volume was recorded as 13,5 ml. In the thesis, germ line chimera was developed for S.t. macrostigma in order to be used in surrogate reproduction technologies and gene transfer systems. After culture of oogonial stem cells it was suggested that 2,7*106 ± 1,3*106 cells/ ml cell count should be used in transplantation technologies.